( 支原體液體培養(yǎng)基 4mL*20 支 / 盒 )
1、操作方法:
一、肺炎支原體分離培養(yǎng):
1. 使用支原體樣本采集液采集樣本,將采集的樣本進(jìn)行振蕩混勻;取 200-400 μL 混勻后的樣本采集液加入到支原體液體培養(yǎng)基中,顛倒混勻后,放入 37 ℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),同時(shí)培養(yǎng) 1 支不加樣本的支原體液體培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照;
2. 每天觀察培養(yǎng)基顏色變化,培養(yǎng)基變橙黃,且澄清無(wú)沉淀,表明支原體分離培養(yǎng)陽(yáng)性;顏色無(wú)變化,可繼續(xù)培養(yǎng)觀察,14 天后仍無(wú)顏色變化,且澄清無(wú)沉淀,表明支原體分離培養(yǎng)陰性,應(yīng)根據(jù)臨床癥狀及其他檢測(cè)方法綜合判定;培養(yǎng)基變橙黃,但渾濁或有沉淀,樣本可能被污染,可將采集液保存的樣本過(guò)濾后重新培養(yǎng)或重新采樣;
( 支原體樣本采集液 2mL*20 支 / 盒 )
二、肺炎支原體增菌培養(yǎng):
1. 將肺炎支原體分離培養(yǎng)變?yōu)槌赛S色,且澄清無(wú)沉淀的培養(yǎng)基立即震蕩混勻,取 200-400 μL 加入到支原體液體增菌培養(yǎng)基中,顛倒混勻后,放入 37 ℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),同時(shí)培養(yǎng) 1 支不加樣本的支原體液體增菌培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照;
2. 每天觀察培養(yǎng)基顏色變化,培養(yǎng)基變橙黃色,且澄清無(wú)沉淀,立即進(jìn)行涂板和保菌;
( 支原體液體增菌培養(yǎng)基 10mL*20 支 / 盒 )
三、肺炎支原體涂板:
將肺炎支原體增菌培養(yǎng)變?yōu)槌赛S色,且澄清無(wú)沉淀的培養(yǎng)基振蕩混勻,選擇 2~3 個(gè)適宜稀釋度的菌液各 10 μL 加入支原體瓊脂平板中,用接種環(huán)涂布均勻,倒置,放入 37 ℃ 培養(yǎng)箱需氧培養(yǎng) 5~7 天;將支原體瓊脂平板放到電子顯微鏡下進(jìn)行觀察,菌落呈典型“油煎蛋”狀,大小不一,大的直徑超過(guò) 1mm ;
( 支原體瓊脂平板 70mm*10 塊 / 包 )
四、肺炎支原體保菌:
將肺炎支原體增菌培養(yǎng)變?yōu)槌赛S色,且澄清無(wú)沉淀的培養(yǎng)基放入離心機(jī),12000 離心力,4 ℃ ,離心 20 min,棄上清,向管中加入 2mL 支原體菌種保存液重懸,重懸菌液按 500 μL 每管分裝于 4 支空凍存管中,做好標(biāo)記,-70 ℃ 及以下冷凍保存。
( 支原體菌種保存液 2mL*20 支 / 盒 )
2、試驗(yàn)現(xiàn)象圖片:(無(wú))
( 圖 1 使用支原體液體培養(yǎng)基對(duì)樣本進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)前/后對(duì)照?qǐng)D片 )
( 圖 2 使用支原體液體增菌培養(yǎng)基對(duì)分離培養(yǎng)變?yōu)槌赛S色的樣本進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)前/后對(duì)照?qǐng)D片 )