( 百日咳鮑特菌增菌培養(yǎng)檢測(cè)試劑盒(帶拭子) 20T/盒 )
1、操作方法
①樣本采集
根據(jù)采樣要求,使用鼻/咽拭子采集樣本;將采樣拭子放到百日咳鮑特菌樣本采集液中,折斷采樣拭子桿高出部分或按斷點(diǎn)折斷拭子,擰緊蓋子,標(biāo)記樣本信息,冷藏送至實(shí)驗(yàn)室處理。
若標(biāo)本預(yù)計(jì) 48h 內(nèi)進(jìn)行檢測(cè),可于 2~8℃ 冷藏保存;若標(biāo)本計(jì)劃 1 個(gè)月內(nèi)完成檢測(cè),可于 -20℃ 低溫凍存;若標(biāo)本需長(zhǎng)期保存,可 -70℃ 以下超低溫凍存。低溫保存期間標(biāo)本不可凍融。
( 百日咳鮑特菌樣本采集液 2mL*50支 /盒 )
②樣本處理:
將樣本采集液中的鼻/咽拭子充分?jǐn)D壓 50~80 次或者渦旋震蕩 30s ,讓標(biāo)本中的細(xì)菌均勻分布于采集液。凍存標(biāo)本需解凍溶化后按上述方法混勻使用。處理后的標(biāo)本可進(jìn)行 PCR 鑒定,也可以接種于選擇培養(yǎng)基或增菌培養(yǎng)基進(jìn)行分離培養(yǎng)。
③樣本增菌:
1)增菌液配制:百日咳鮑特菌增菌液須現(xiàn)用現(xiàn)配,實(shí)驗(yàn)前取所需數(shù)量的基礎(chǔ)增菌液、添加劑 A、添加劑 B,無(wú)菌操作放入生物安全柜,溶化后將添加劑 A、B 顛倒混勻瞬時(shí)離心,分別取添加劑 A 20μL、添加劑 B 200μL 加入到 1.8 mL 的基礎(chǔ)增菌液中混勻備用。
注:①實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作;②百日咳鮑特菌增菌液需要現(xiàn)用現(xiàn)配;③添加劑反復(fù)凍融會(huì)降低分離培養(yǎng)效果,建議第一次使用后適當(dāng)分裝凍存。
2)增菌培養(yǎng):取 200μL 混勻后的采集液,加入到 2 mL 現(xiàn)配的百日咳鮑特菌增菌液中,36±1?C 靜置培養(yǎng) 48 h~72 h。
④平板培養(yǎng):
平板培養(yǎng):增菌后充分混勻培養(yǎng)液,取 50-100μL 的增菌液劃線或者直接涂抹于木炭選擇性瓊脂平板上,37±1?C 培養(yǎng) 3~7 天,挑取疑似菌落進(jìn)行鏡檢、生化試驗(yàn)、熒光 PCR 或者質(zhì)譜等方法鑒定。
2、百日咳鮑特菌菌落圖片:
( 銀灰色菌落: 疑似百日咳鮑特菌、副百日咳鮑特菌 )