彎曲菌分離培養(yǎng)檢測試劑盒（糞便樣本） / 彎曲菌分離培養(yǎng)檢測試劑盒（食品樣本）
1、操作方法：
①樣本處理
以禽肉為例：取分割禽肉（大于 250g，適當(dāng)分割成若干塊）或整禽放入無菌自封袋中，加入適量 BPW 培養(yǎng)液（即 10 倍稀釋后的 BPW 母液）淹沒樣本（一般每 1 kg 樣本加入 500mL BPW），以 100 r/min 的速度震蕩 15min, 無菌操作取出禽肉（低溫冷藏過夜浸泡后取出畜肉，檢出效率更高），盥洗液用于檢測。
（BPW母液：10倍稀釋后使用）
以糞便為例：將沾有糞便的棉簽或者肛拭子直接溶于試劑盒提供的2ml的彎曲菌促生長增菌培養(yǎng)液中，充分混勻，松開瓶蓋， 37℃或者42℃微需氧環(huán)境，增菌培養(yǎng)24h。
注意：彎曲菌需要微需氧培養(yǎng)，沾有糞便的棉簽或者肛拭子盡量全部插入液體內(nèi)。標(biāo)本建議 4h 內(nèi)進(jìn)行分離培養(yǎng)檢測。
（Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基）
②增菌培養(yǎng)：取 2ml 的盥洗液加入到彎曲菌增菌培養(yǎng)液中(4ml)，充分混勻，置于微需氧環(huán)境下（5% O2、10% CO2和 85% N2），不同培養(yǎng)溫度增菌 24h 用于檢測。
注意：將促生長增菌液搖勻，然后螺口擰松，于微需氧環(huán)境下 37℃或者 42℃ 增菌培養(yǎng) 24h；微需氧環(huán)境可由下列幾種方式提供，當(dāng)使用密閉盒方式培養(yǎng)時(shí)，需注意微需氧產(chǎn)氣包的規(guī)格型號(hào)需與密閉盒的容積相對(duì)應(yīng)，例如當(dāng)使用 2.5L 密閉盒時(shí)，需要使用 2.5L 微需氧產(chǎn)氣包。
（ 促生長增菌液 / 智能厭氧微需氧培養(yǎng)系統(tǒng)（配備彎曲菌專用培養(yǎng)罐） / 微需氧產(chǎn)氣包 ）
③雙孔濾膜法培養(yǎng)：無菌操作，將濾膜輕輕貼在平板的中央表面（有網(wǎng)格面向上），注意不要產(chǎn)生氣泡（可用彎頭鑷子輕輕讓膜與平板充分接觸）。取 250ul-300ul 樣本懸液分 5 點(diǎn)～7 點(diǎn)滴于兩個(gè)孔中的濾膜上，培養(yǎng)基平面朝上擱置 45-60min，棄濾膜。37℃微需氧條件倒置培養(yǎng) 48h。
（ 雙孔板培養(yǎng)基 / 彎曲菌選擇性濾膜 ）
注意事項(xiàng)：
1. 在貼膜揭膜過程中，要全程保持鑷子無菌。貼膜時(shí)，藍(lán)色網(wǎng)格面向上，隨后藍(lán)色保護(hù)膜會(huì)自動(dòng)卷曲翹起，將藍(lán)色薄膜取出丟棄。
2. 加樣前震蕩或吹打充分混勻標(biāo)本。
3. 所加液體不能溢出濾膜邊緣，否則實(shí)驗(yàn)失敗。
4. 靜置時(shí)間應(yīng)足夠長（45min 以上），待彎曲菌充分透過濾膜后，方可揭去濾膜。
④菌落鑒定（鏡檢、生化鑒定、PCR鑒定）
鏡檢：
菌落形態(tài)：初次分離培養(yǎng) 2~3 天菌落不溶血，扁平，濕潤、有光澤，邊緣完整，發(fā)亮；5~6 天后菌落增大顏色灰白、扁平、菌落不溶血。
取雙孔板濾膜印跡內(nèi) 3-4 個(gè)疑似菌落，進(jìn)行涂板于微需氧環(huán)境中純化培養(yǎng)。（無須劃線培養(yǎng)，直接挑取單菌落；純化培養(yǎng)以滿足后續(xù)鑒定所需要的菌量，推薦使用如下哥倫比亞血平板或Karmali 平板）
生化鑒定：
挑取合適菌量的純培養(yǎng)細(xì)菌進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)、過氧化氫酶試驗(yàn)、馬尿酸鹽水解試驗(yàn)和吲哚乙酸酯水解試驗(yàn)，進(jìn)行初步鑒定。
（彎曲菌生化檢測試劑盒 20T/盒）
PCR核實(shí)鑒定：
彎曲菌五重核酸檢測試劑盒（探針法） / 彎曲菌六重核酸檢測試劑盒（探針法）
⑤彎曲菌的保存及運(yùn)輸
保存：
將鑒定后的單菌落進(jìn)行增菌，用無菌接種環(huán)（或者棉拭子）將平板上的所有菌苔全部收集，均勻懸浮于盛有彎曲菌保存培養(yǎng)基、保存液的凍存管中，-80 ℃冷凍保存或者液氮保存。
（注意：不可菌量少而保存液過多，一般滿菌環(huán)的菌量需要 0.5ml 的保存液）
運(yùn)輸：
運(yùn)送前，將彎曲菌運(yùn)輸培養(yǎng)基從 4 ℃冰箱中取出平衡至室溫，用無菌接種環(huán)收集生長旺盛菌苔（10ul 接種環(huán)，滿環(huán)），將收集好菌的接種環(huán)直接插入彎曲菌運(yùn)輸培養(yǎng)基中部，緩慢取出接種環(huán)（注意取出接種環(huán)后，盡量讓細(xì)菌保留在運(yùn)輸培養(yǎng)基的中部?。?，擰緊管蓋，進(jìn)行保鮮運(yùn)輸（4℃運(yùn)輸）或者室溫運(yùn)輸（不超過 7 天），2周內(nèi)皆可100%復(fù)蘇。
（ 菌種保存液 / 菌種運(yùn)輸培養(yǎng)基 ）
⑥PCR分型
（ 格林-巴利綜合征高風(fēng)險(xiǎn)空腸彎曲菌血清篩查試劑盒（9類11種）/ 空腸彎曲菌十種毒力基因多重核酸檢測試劑盒（探針法））